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大鼠睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒

更新时间:2021-06-27

简要描述:

大鼠睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒 应用双抗体夹心法测定标本中大鼠睫状神经营养因子(CNTF)水平。用纯化的大鼠睫状神经营养因子(CNTF)抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入睫状神经营养因子(CNTF),再与HRP标记的睫状神经营养因子(CNTF)抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色。

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操作步骤

  • 标准品的稀释:大鼠睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒 提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。

320ng/L

5号标准品

150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

160ng/L

4号标准品

150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

80ng/L

3号标准品

150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

40ng/L

2号标准品

150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

20ng/L

1号标准品

150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

  • 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
  • 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
  • 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
  • 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
  • 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
  • 温育:操作同3。
  • 洗涤:操作同5。
  • 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟.
  • 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
  • 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。大鼠睫状神经营养因子(CNTF)ELISA试剂盒

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