Caco-2-RFP细胞

Caco-2-RFP​​细胞
规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶
特点：细胞代数为4代以内
包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书
细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC
货期：2-3周
运输方式：快递运输
售后：收到细胞后7天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时联系销售人员，我们将尽快为您解决

Caco-2-RFP​细胞

1，签收细胞后状态稳定可以先冻存留种
2，传代当天用普通培养基，不要加嘌呤霉素，待细胞培养1-2天，密度达到40%后再加
3，阶梯式加药：待到细胞密度40%以上后，初次加1ug/ml维持观察2天左右，细胞状态无影响再加到1.5-2ug/ml，观察2天无影响后，最后加到3ug/ml
4，复苏后，待细胞状态稳定，密度40%以后，直接加3ug/ml，梯度加药主要是针对第一次使用嘌呤霉素的时候，以免不同实验室的药物浓度和活性差异较大，第一次直接使用高浓度把细胞状态弄受损
5，冻存后复苏初期，可以用15%血清，让状态尽快稳定，然后再降为10%

GFP 和 RFP 分别转染的绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白 直接在荧光显微镜下 即可观察
LUC是萤火虫荧光素酶 需要加底物（D-荧光素钠盐）发光  激发和发射波长分别为328nm和533nM

培养细胞死亡
1.培养箱内无 CO2
建议检测培养箱内 CO2
2.培养箱内温度波动太大
建议检查培养箱内温度
3.细胞冻存或复苏过程中损伤
建议取新的保存细胞种
4.培养液渗透压不正确
建议检测培养液渗透压。注意：大多数哺乳动物细胞能耐受
渗透压为 260 – 350 mOsm/kg。加入额外试剂如 HEPES
或药物都有可能影响培养液渗透压。
5.培养液种有毒代谢产物堆积
建议换入新鲜培养液

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满*培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。从细胞资源中心获得细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作。
将细胞悬液移入离心管，1000rpm/min 离心5分钟。上清培养液移入无菌瓶中，留待日后培养用。离心下来的细胞T25瓶中加培养液6-8ml，混匀后放入37℃、5%CO2孵箱培养。
传代方法：
细胞生长至1X106/ml时（一般情况），将细胞悬液移入离心管800-1000rpm/min离心5分钟，然后弃上清，加新鲜培养液混匀，1瓶分成3瓶（或6瓶-10瓶），每T25瓶加培养基至6-8ml，37℃、5%CO2孵箱培养