B16-RFP细胞

B16-RFP细胞

规格：70%密度的25cm2培养瓶的细胞一瓶

特点：细胞代数为4代以内
包装：内层无菌自封袋；专用防压泡沫盒；外层防压保温气泡袋；说明书
细胞来源：ATCC、sciencell、ICLC
货期：2-3周
运输方式：快递运输
售后：收到细胞后7天，如发现细胞有质量问题（如污染，死亡，快递运输等原因）时，应出具书面质量问题报告并及时联系销售人员，我们将尽快为您解决MCF-7-GFP​细胞B16-RFP​细胞

1，签收细胞后状态稳定可以先冻存留种
2，传代当天用普通培养基，不要加嘌呤霉素，待细胞培养1-2天，密度达到40%后再加
3，阶梯式加药：待到细胞密度40%以上后，初次加1ug/ml维持观察2天左右，细胞状态无影响再加到1.5-2ug/ml，观察2天无影响后，最后加到3ug/ml
4，复苏后，待细胞状态稳定，密度40%以后，直接加3ug/ml，梯度加药主要是针对第一次使用嘌呤霉素的时候，以免不同实验室的药物浓度和活性差异较大，第一次直接使用高浓度把细胞状态弄受损
5，冻存后复苏初期，可以用15%血清，让状态尽快稳定，然后再降为10%

GFP 和 RFP 分别转染的绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白 直接在荧光显微镜下 即可观察
LUC是萤火虫荧光素酶 需要加底物（D-荧光素钠盐）发光  激发和发射波长分别为328nm和533nm

 
冻存操作步骤（缓冻）：
冻存液成分：10%DMSO + 30%血清+基础培养液
1、取对数生长期细胞，经胰酶消化后，加入适量冻存液， 用吸管吹打制成细胞悬液（1×106 ~ 5 ×106细胞/ml）
2、加入1ml细胞于冻存管中，冷冻管置于4℃ 15 分钟→ -20℃ 30-60 分钟→ -80℃ 16~18 小时（或隔夜） → 液氮槽长期储存 
复苏操作步骤：
实验前准备：
1.将水浴锅预热至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。
3.在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等