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LUC细胞的培养步骤简单吗

发布时间:2022-05-29   点击次数:67次
  LUC细胞没有固定的培养条件。在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中同样很容易生长。具体培养步骤如下:
  1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
  2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
  3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时,弃去培养基后加入少量胰酶,细胞变圆脱落后,进行离心收集,1000RPM条件下离心8-10分钟,去除上清,按冻存数量加入血清及DMSO,冻存比例为90%FBS+10%DMSO。
  细胞冷冻管解冻培养时,除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养角瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。每次在做胰酶消化分瓶时候把握好消化力度在追求消化打散细胞的同时切勿造成胰酶损伤过度胰酶损伤过度会严重的影响后续细胞的生长和状态严重的损伤后果是细胞直接死亡,这个细胞不难消化,可以尝试用不含EDTA的胰酶进行消化,降低细胞胰酶受损的可能。
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